紀(jì)寧生物
果膠甲酯化程度測(cè)劑盒測(cè)定意義
注 意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
植物細(xì)胞壁中的果膠是植物初生細(xì)胞壁的主要成分,除了起結(jié)構(gòu)支撐、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)茸饔猛猓€具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細(xì)胞壁的堅(jiān)韌程度及其抗性。
測(cè)定原理:
果膠甲酯鍵經(jīng)皂化處理后釋放出甲醇,甲醇與 2,4-戊二酮反應(yīng)顯色,在 412nm 下測(cè)定吸光值;同時(shí)半乳糖醛酸在70℃下與濃硫酸反應(yīng)生成 5-甲?;?2-呋喃甲酸,5-甲?;?2-呋喃甲酸與 3,5-二甲基苯酚反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì),在450nm下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。
測(cè)定意義:
植物細(xì)胞壁中的果膠是植物初生細(xì)胞壁的主要成分,除了起結(jié)構(gòu)支撐、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)茸饔猛猓€具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細(xì)胞壁的堅(jiān)韌程度及其抗性。
測(cè)定原理:
果膠甲酯鍵經(jīng)皂化處理后釋放出甲醇,甲醇與 2,4-戊二酮反應(yīng)顯色,在 412nm 下測(cè)定吸光值;同時(shí)半乳糖醛酸在 70℃下與濃硫酸反應(yīng)生成 5-甲?;?2-呋喃甲酸,5-甲酰基-2-呋喃甲酸與 3,5-二甲基苯酚反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì),在 450nm 下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。
計(jì)算公式
1.甲醇生成量計(jì)算
標(biāo)曲為 y = 0.0298x + 0.009,R2 = 0.9997;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/mL;y 為吸光值△A1。甲醇生成量(μmol/g鮮重)=(ΔA1-0.009) ÷0.0298÷W×V 樣總
=33.56×(ΔA1-0.009)÷W
2.半乳糖醛酸含量計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)曲線為 y = 0.2585x - 0.1746,R2 = 0.9986;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/mL;y 為吸光值△A2。半乳糖醛酸(μmol/g 鮮重)=(ΔA2+0.1746) ÷0.2585÷W×V 樣總
=3.87×(ΔA2+0.1746)÷W
果膠甲酯化程度(%)=甲醇生成量÷半乳糖醛酸含量×100% V 樣總:加入提取液體積,1mL;W,樣本質(zhì)量,g。
上海紀(jì)寧生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的果膠甲酯化程度測(cè)劑盒科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。