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胞苷是人體和動植物體內RNA的結構片段,在生物體內生理生化過程中起著重要的調控作用,具有多方面生理活性;同時胞苷又是很多抗病毒、抗腫瘤和抗艾滋病藥的良好中間體以及基因工程研究的重要原材料。目前國內外制備胞苷的主要方法是化學合成法,即以胞嘧啶和核糖或者以尿苷為主要原料進行制備,但存在反應步驟多,反應條件苛刻,操作繁瑣,環(huán)境污染較大和原料成本高的問題?!钒沼置奏ず塑眨卺t(yī)藥方面和食品工業(yè)中應用十分廣泛。本文對胞苷的提取方法主要采用發(fā)酵法。并以枯草芽孢桿菌為例,簡述了發(fā)酵提純的基本步驟,對其進行紫外光誘變及篩選。
無色或白色結晶,或結晶性粉末。有特殊氣味。相對分子質量367.17。熔點260℃(分解)。不溶于乙醇,溶于水。
分子式:
胞苷是人體和動植物體內RNA的結構組成部分,在生物體內生理生化過程中起著重要的調節(jié)作用,具有多方面生理活性;同時,胞苷又是很多抗病毒、抗腫瘤和抗艾滋病藥物的良好原材料。其核苷衍生物,可改善頭部外傷后或腦手術后意識障礙的意識狀態(tài)及腦電圖,促進腦卒中偏癱病人的上肢運動功能的恢復,對促進大腦功能恢復、促進蘇醒有一定作用。促進卵磷脂生物合成和抗磷脂酶A作用。與蛋白分解酶抑制劑合用,可保護及修復胰腺組織。目前對于胞苷的合成方法很多,主要是化學方法。可以利用微生物發(fā)酵法生產,具有低成本、產率高等有點。隨著人類的發(fā)展,對天然嘧啶核苷的需求量逐漸加大,于是,發(fā)酵法生產胞苷的研究也日益得到更廣泛的重視。而發(fā)酵發(fā)采用選育技術獲得的菌株能夠大規(guī)模且單一地生產胞苷。這對我國在胞苷的市場有著重大的意義。
①治療眼科疾?。河冒啄憠A配合遮蓋治療大齡弱視1-3個療程。80%單只眼視力可提高兩行以上,采用胞二磷膽堿聯合物理綜合療法治療弱視。其作用機制可能是通過延長或重建人視覺敏感期。降低細胞功能闞,提高細胞活性,減少中樞對弱視眼的抑制等方面來起到提高視力的作用;
②治療精神疾?。核Π啄憠A治療陰性癥狀精神分裂癥閉或聯合丹參注射液等治療抑郁癥,均取得了一定療效,其作用機制是胞二磷膽堿能增強腦干網狀結構上行激活系統(tǒng)的功能,改善腦血管張力,提高神經系統(tǒng)的代謝與功能。
③刺加穴位注射治療重癥周圍性面癱噸:采取針利透穴加穴位注射胞二磷膽堿、維生素、利多卡因等藥物,有效可達90%以上。穴位注射胞二磷膽堿有效地增加了面神經的營養(yǎng),使面癱得以營養(yǎng)。
④治療新生兒缺氧性腦病:可提高治愈好轉率,減少病死率,對輕度新生兒缺氧性腦病的治療預后較好,對中度者其后遺癥發(fā)生率明顯降低,但重度折預后不良。
可以從發(fā)酵液中提取胞苷二磷酸膽堿,也可以采用傳統(tǒng)的方法,從RNA中經過化學方法水解,然后制備2中嘧啶核苷,這不僅僅需要大量的優(yōu)質RNA原料,而且2種嘧啶核苷及兩種嘧啶核苷都必須產銷平衡,否則成本很高。所以采用發(fā)酵液中提取。
1直接發(fā)酵法
直接借助微生物具有合成自身所需要核苷的能力,通過對特定微生物的誘變處理,選育出營養(yǎng)缺陷型及核苷類似物抗性突變株。以接觸代謝調節(jié)中的反饋機制和反饋阻遏,從而達到目的。從而產生大量優(yōu)質的胞苷。
2通過基因重組技術構建胞苷生產菌進行發(fā)酵生產
可以利用基因重組,將可以產生核苷生產菌的相關基因導入簡單易操作的菌種中,對其進行培養(yǎng),最終利用從發(fā)酵液中提取的方法獲得大量胞苷。經過傳統(tǒng)誘變得到的菌株會產生大量次級突變,具有菌體生長速度慢等弱點,是目前工業(yè)生產中難以解決的問題?;蚬こ碳夹g改造菌株,如基因克隆、基因敲除等,因其無次級突變、改造目的性強、實驗周期短等優(yōu)勢逐漸受到人們的重視。
可利用711(cl-)型陰離子交換樹脂柱層析分離。711離子交換樹脂cl-型柱(20-50目),柱高60厘米,直徑3厘米,流速每分鐘每平方厘米2毫升左右??筛鶕b定出樣液的成分推算出胞苷的峰值,得到純化。