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沙棘,又稱醋柳、酸刺,是一種多年生的灌木或小喬木,屬于胡頹子科沙棘屬富含生物活性物質(zhì)的天然植物。沙棘果中除含有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物外,還有人體必需的多種維生素和無機(jī)鹽,其中維生素含量豐富,尤以VC含量為高,幾乎居一切果蔬之冠。沙棘果具有很高的食用和藥用價值。沙棘果含有沙棘黃酮、超氧化物歧化酶、ω-6多不飽和脂肪酸、哈爾滿堿、5-羥色胺等對人體具有特殊保健作用的生物活性物質(zhì)。具有活血化瘀、化痰寬胸、補(bǔ)脾健胃、生津止渴、清熱止瀉、消炎生肌、抑制腫瘤等功效。沙棘產(chǎn)品在食品和藥品行業(yè)被廣泛應(yīng)用,倍受企業(yè)和相關(guān)行業(yè)的青睞。
哈爾滿堿,異名去甲氧去氫駱駝蓬堿;2-甲基-B-咔啉;3-甲基-4-咔啉,廣泛存在于最大革蓋菌、蘑菇和植物體,屬于B-咔啉生物堿。分子式為C12H10N2,分子量為182.22,為黃褐色粉末或結(jié)晶體,熔點(diǎn)230~232℃,在紫外燈下呈亮藍(lán)色熒光。
哈爾滿堿主要用于真菌所致的癬類皮膚病、濕疹、燒傷、靜脈曲張性潰瘍等癥(趾間發(fā)癬菌,MIC=1.6~200.0μg/mL);低劑量時為運(yùn)動抑制劑,高劑量時引起驚厥;抑制活性鈉轉(zhuǎn)移,Na+,K+-腺苷三磷酸酶抑制劑;植物生長調(diào)節(jié)劑;子宮興奮劑。臨床上將哈爾滿用于治療腎上腺素或去甲腎上腺素水平低下所引起的疾病??苫钛觥⒅慰人?、勞傷吐血、跌打、月經(jīng)不調(diào)。
有研究觀察穿山龍?zhí)崛∥?extractfromDioscoreaenipponicaeRhizoma,DNR)聯(lián)合哈爾滿堿(harmane)對人肝癌細(xì)胞(HepG2)增殖抑制作用及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)理。方法采用MTT法檢測藥物對細(xì)胞的生長抑制作用,應(yīng)用等效曲線-相互指數(shù)法(isobole-interactionindexmethod)評價兩藥的相互作用,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞凋亡率,Western印跡法檢測凋亡蛋白procaspase-3的表達(dá)。
結(jié)果穿山龍?zhí)崛∥?DNR)與哈爾滿堿質(zhì)量濃度比為2∶1時,I(相互指數(shù))=0.768<1,聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用;質(zhì)量濃度比為1∶2時,I=1.041≈1.0,聯(lián)合用藥具有相加作用。FCM法檢測聯(lián)合用藥48、72h細(xì)胞凋亡率與單獨(dú)用藥相比分別增加了10.44%、50.06%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Western印跡法檢測聯(lián)合用藥誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一可能與procaspase-3蛋白的表達(dá)有關(guān)。結(jié)論DNR聯(lián)合哈爾滿堿在體外有明顯的協(xié)同抗腫瘤的作用,其可能的機(jī)制是影響procaspase-3蛋白的表達(dá)。
工藝過程:分為二部分。
第一部分是沙棘的前處理。沙棘果是資源利用的源頭,通過對不同部位原料的處理,可以得到沙棘果汁、沙棘種籽等用于高附加值產(chǎn)品開發(fā)的產(chǎn)品,沙棘皮渣經(jīng)過干燥粉碎后,用來進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn),提取目標(biāo)產(chǎn)物。工藝流程如下:
第二部分是目標(biāo)產(chǎn)物的提取,工藝流程如下:
操作要點(diǎn):
1)沙棘果枝條的采收和清洗
采集的帶果沙棘枝條長度小于5cm,粗小于6mm,可帶少許葉;剔出生青果、病爛果和泥漿果,以及石塊、金屬器具等硬物、異物。采集的沙棘果須用木制或竹制容器盛裝,不得用其他材料制成的容器盛裝。清洗用水必須符合GB5749的規(guī)定,加工環(huán)境要清潔衛(wèi)生,盡量消除有害生物的發(fā)生繁殖,防止有害生物接觸加工和處理設(shè)備。
2)離心取汁
沙棘果經(jīng)沖洗干凈后用PK-121R離心機(jī)高速(4000轉(zhuǎn)/min)離心分離,得清汁,清汁收集后用于生產(chǎn)沙棘汁為原料的其他產(chǎn)品,如沙棘飲料、沙棘酒、沙棘果醋、沙棘口服液、沙棘果粉、沙棘維生素P粉等產(chǎn)品。沙棘果離心機(jī)轉(zhuǎn)速要求3500~4500轉(zhuǎn)/min、離心6min時,出汁率達(dá)78%以上。
3)種籽與果皮的分離
沙棘果經(jīng)離心機(jī)高速(4000轉(zhuǎn)/min)離心分離后得到果皮與種籽,經(jīng)過晾曬、脫皮、篩選等工序,分離出其中的沙棘種籽、枝條,收集果皮渣。沙棘果皮渣經(jīng)過干燥、粉碎、過篩后備用,做為提取哈爾滿堿的原料。
4)目標(biāo)產(chǎn)物的提取
采用超聲波提取法,以乙醇為溶劑,通過實(shí)驗(yàn),確定適宜的乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、料液比、提取時間及提取次數(shù),得出哈爾滿堿最佳提取參數(shù)。
5)樹脂純化
將大孔樹脂D101用95%乙醇浸泡24h,使其充分膨脹,濕法裝柱,然后用95%乙醇液洗至流出液無白色混濁現(xiàn)象,再用去離子水洗凈乙醇,直至流出液無渾濁為止。取最佳優(yōu)化工藝的提取液,確定提取液與樹脂用量(柱體積)比約為1∶1(g/mL)上樣,選用洗脫劑為80%乙醇,洗脫體積為5個柱體積,收集洗脫液,薄層層析判斷有效成分。有效洗脫成分減壓濃縮濾液,真空干燥。
6)檢測
對所得的目標(biāo)提取物,用高效液相色譜法進(jìn)行測定。采用超聲波提取法,以乙醇為溶劑,通過實(shí)驗(yàn),得出哈爾滿堿最佳提取參數(shù)。確定適宜的乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%、提取溫度為70℃、料液(V∶m)比35,提取時間70min,提取次數(shù)為2次,提取液經(jīng)大孔樹脂純化,最后用高效液相色譜法檢測目標(biāo)產(chǎn)物含量。通過所設(shè)計工藝進(jìn)行沙棘皮渣中哈爾滿堿的提取和分離,1000g沙棘皮渣中可提取到32%的哈爾滿提取物7.67g。
[1] 沙棘皮渣中哈爾滿堿制備技術(shù)研究
[2] CN201010564792.7一種從沙棘果渣中制備哈爾滿堿的方法
[3] 穿山龍?zhí)崛∥锫?lián)合哈爾滿堿對肝癌HepG2細(xì)胞增殖及凋亡的影響