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考馬斯亮藍(lán)(Coomassie Brilliant Blue)是兩種三苯甲烷衍生物染料(G-250和R-250)的統(tǒng)稱,起初開(kāi)發(fā)用于紡織行業(yè),但現(xiàn)在通常用于分析生物化學(xué)中的蛋白質(zhì)染色??捡R斯亮藍(lán)G-250比考馬斯亮藍(lán)R-250多兩個(gè)甲基。其名“考馬斯”是帝國(guó)化學(xué)工業(yè)下的一個(gè)注冊(cè)商標(biāo)。
考馬斯亮藍(lán)R-250在1964年被Fazekas de St.Groth的團(tuán)隊(duì)最先用來(lái)觀察蛋白。蛋白樣品在醋酸纖維素薄膜上進(jìn)行電泳分離。薄膜隨后被放置于5-磺基水楊酸中,使蛋白質(zhì)條帶固定,然后將膜浸到染料溶液中。
兩年之后,1965年Meyer和Lambert用考馬斯亮藍(lán)R-250去染經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠分離的蛋白質(zhì)樣品。他們將膠浸在含有甲醇乙酸和水的溶液中。由于染料在染色蛋白質(zhì)的同時(shí)也染了聚丙烯酰胺凝膠,為了使蛋白質(zhì)條帶可見(jiàn),他們對(duì)電泳的凝膠進(jìn)行了脫色。后續(xù)的文獻(xiàn)報(bào)道聚丙烯酰胺凝膠可以被乙酸溶液成功脫色。
在1967年,首次出現(xiàn)使用考馬斯亮藍(lán)G讓聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白條帶變得可見(jiàn)的報(bào)道,其中染料被溶解在含有甲醇的乙酸溶液中。之后發(fā)現(xiàn),如果使用溶解在不含甲醇的三氯乙酸考馬斯亮藍(lán)G膠體,可以使蛋白質(zhì)條帶被染色,而聚丙烯酰胺不被染色。如果用這種方法,就沒(méi)有必要再對(duì)膠進(jìn)行脫色?,F(xiàn)代的手段通常是將考馬斯亮藍(lán)G溶解在含有磷酸、乙醇(或甲醇)和硫酸銨(或硫酸鋁)的溶液中。
布拉德福蛋白質(zhì)定量法利用了考馬斯亮藍(lán)G-250的光譜性質(zhì)去檢測(cè)溶液中的蛋白質(zhì)含量。將蛋白質(zhì)樣品加入到染料的磷酸和乙醇的溶液中。在酸性環(huán)境中,這種染料通常呈現(xiàn)棕紅色,但是結(jié)合了蛋白質(zhì)之后,染料形成藍(lán)色形態(tài)。溶液的吸光度在595nm波長(zhǎng)處測(cè)定。這種染料非常著名,因?yàn)樗懈哽`敏性,即使只有5μg蛋白也足以使染料變色。然而,這種方法有一個(gè)缺點(diǎn)是變色程度因蛋白質(zhì)種類(lèi)不同而不同:?jiǎn)挝涣康鞍踪|(zhì)帶來(lái)的吸光度改變?nèi)Q于蛋白質(zhì)的類(lèi)型。
與蛋白質(zhì)結(jié)合后,帶負(fù)電荷的考馬斯亮藍(lán)G-250分子會(huì)讓蛋白質(zhì)整體帶上負(fù)電荷。這個(gè)性質(zhì)可以被用來(lái)分離蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物,使用非變性條件下的聚丙烯酰胺凝膠電泳——Blue Native PAGE電泳。這樣的復(fù)合體的遷移能力既取決于蛋白質(zhì)復(fù)合體的分子質(zhì)量,也取決于結(jié)合到蛋白質(zhì)上的染料量。
考馬斯亮藍(lán)染色,也可以用于western印跡分析中的一步。它的作用是先于抗體的染色,使之可以作為對(duì)照。
2009年,考馬斯亮藍(lán)G在實(shí)驗(yàn)中被用來(lái)治療實(shí)驗(yàn)室大鼠的脊髓損傷。它通過(guò)減少個(gè)體腫脹反應(yīng)而生效,而腫脹反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致?lián)p傷區(qū)域的神經(jīng)元死于代謝的壓力。這個(gè)方法在大鼠上測(cè)試有效。兩組脊髓損傷大鼠中,一組給予考馬斯亮藍(lán)G處理,一組沒(méi)有處理。測(cè)試結(jié)果證明,相較于沒(méi)有處理的大鼠,用染料處理的大鼠可以更好的運(yùn)動(dòng),并且在運(yùn)動(dòng)測(cè)試中取得更高的得分。這種治療能否用在人類(lèi)身上的相關(guān)測(cè)試還在進(jìn)行中。近期的實(shí)驗(yàn)中曾在損傷后15分鐘后,施予染料治療有效。但是在現(xiàn)實(shí)生活中,病人需要一定時(shí)間才能趕到急救室,所以這種治療應(yīng)該即使在受傷后兩小時(shí)后施放仍然有效。唯一報(bào)道的副作用是大鼠會(huì)短暫的變藍(lán)。