手機(jī)掃碼訪問本站
微信咨詢
產(chǎn)品信息
Catalogue No : C796
Product Format : a T25 flask
Culture Properties: 貼壁
Complete Growth Medium : 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere : air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application : Cells and cancer research
NOTE : FOR RESEARCH USE ONLY
細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟
1. 吸走用于培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞。
2. 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;(細(xì)胞對于消化比較敏感,消化過度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時(shí)即可終止,禁止消化到細(xì)胞完全漂浮。混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細(xì)胞混勻。
4. 將混勻的細(xì)胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
傳代比例 : 不同細(xì)胞生長速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定,大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
細(xì)胞保存
1. 凍存液:92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)
2. 降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。
小提示
1. 細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞,再900-1000rpm(約150g)離心3min,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。
2. 細(xì)胞生長不均時(shí),可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
3. 細(xì)胞生長緩慢時(shí),可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(最高不超過20%),也可以根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài),選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
4. 不同細(xì)胞貼壁性差異比較大,所以消化時(shí)間差別較大,20s-10min均有可能,具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準(zhǔn),嚴(yán)禁消化到細(xì)胞完全漂浮??蛻粝^度導(dǎo)致細(xì)胞死亡、漂浮、生長緩慢,不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
5. 干冰發(fā)貨均為兩支,客戶先復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳,我方不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
6. 細(xì)胞狀態(tài)正常時(shí),應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種,凍存后應(yīng)隨機(jī)抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé),客戶凍存細(xì)胞死亡不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
WalkerLLC-WRC256大鼠腹水癌細(xì)胞
注意事項(xiàng)
客戶收到細(xì)胞有任何疑問請及時(shí)致電我們,細(xì)胞收到后1周內(nèi)沒有任何電話,或其他形式回訪,默認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)量沒問題,之后出了任何問題不給予免費(fèi)售后。細(xì)胞免費(fèi)售后只提供一次,若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費(fèi)補(bǔ)發(fā),細(xì)胞收貨時(shí)已經(jīng)死亡或密度不足的除外。