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傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液。
細(xì)胞背景描述
PA 317細(xì)胞源自TK -N IH /3T3細(xì)胞,通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)D N A (pPAM 3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞,結(jié)果生成可以感染許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。PA317細(xì)胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟悾赡芤驗(yàn)橛糜跇?gòu)建PA317細(xì)胞而轉(zhuǎn)入的D N A 丟失,能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA 317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。在含0.03m M 次黃嘌呤、0.001m M 氨甲喋呤和0.02m M 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇,可以選出保留了包裝功能的細(xì)胞。選擇后,PA 317細(xì)胞應(yīng)在H T培養(yǎng)基(0.03m M 次黃嘌呤、0.02m M 胸苷)中培養(yǎng)4天,以稀釋殘留的氨甲喋呤,此后PA317細(xì)胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個(gè)月。
收到常溫細(xì)胞后如何處理
細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)操作步驟請(qǐng)參照紀(jì)寧生物細(xì)胞培養(yǎng)操作指南