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成分 |
N+2個(gè)制備所得樣品 |
qRT-PCR 陰性對(duì)照 |
qRT-PCR 陽性對(duì)照 (2-7 管) |
2×qRT-PCR 緩沖液 |
10μL |
10 μL |
各 10 μL |
豬環(huán)曲病毒染料法qRT-PCR 引物混合物 |
2 μL |
2 μL |
各 2 μL |
50×ROX (見注) |
0.4μL |
0.4μL |
各 0.4μL |
樣品制備所得 RNA 模板 (來于第 8 步) |
5.6μL |
-- |
-- |
稀釋所得 6 個(gè)陽性對(duì)照 (來于第 6 步) |
-- |
-- |
各 5.6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào) 管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) |
超純水 |
-- |
5.6μL |
-- |
10×qRT-PCR 酶混合液 |
2μL |
2μL |
2μL |
成分 |
N+2個(gè)制備所得樣品 |
qRT-PCR 陰性對(duì)照 |
qRT-PCR 陽性對(duì)照 (2-7 管) |
2×qRT-PCR 緩沖液 |
10μL |
10 μL |
各 10 μL |
豬環(huán)曲病毒染料法qRT-PCR 引物混合物 |
2 μL |
2 μL |
各 2 μL |
50×ROX (見注) |
0.4μL |
0.4μL |
各 0.4μL |
樣品制備所得 RNA 模板 (來于第 8 步) |
5.6μL |
-- |
-- |
稀釋所得 6 個(gè)陽性對(duì)照 (來于第 6 步) |
-- |
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各 5.6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào) 管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) |
超純水 |
-- |
5.6μL |
-- |
10×qRT-PCR 酶混合液 |
2μL |
2μL |
2μL |
過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
RT(逆轉(zhuǎn)錄) |
50℃ |
15-30 min |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
Qrt-PCR反應(yīng) 40 個(gè)循環(huán) |
95℃ |
15 sec |
58℃ |
1 min,(采集FAM通道的熒光信號(hào)) |
|
按儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行溶解曲線分析 |