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一、基本信息 |
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細(xì)胞名稱 |
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細(xì)胞編號 |
JN-CC2494 |
細(xì)胞品牌 |
紀(jì)寧生物 |
細(xì)胞規(guī)格 |
1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管 |
種屬來源 |
人 |
組織來源 |
結(jié)腸 |
細(xì)胞形態(tài) |
上皮細(xì)胞樣 |
活性檢測報告 |
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細(xì)胞簡介 |
Luciferase SW480細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定,培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持??捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。SW480細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。SW480源自原位直腸腺癌,和SW620細(xì)胞源自同一病人一年后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。CSAp和直腸抗體3陰性;角蛋免疫過氧化物酶染色陽性。p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代,309位密碼子的C→T突變導(dǎo)致Pro→Ser替代。細(xì)胞p53蛋白表達(dá)水平提高,癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽性,癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測。SW480 [SW-480]細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞溶解酶,一種與腫瘤入侵相關(guān)的金屬蛋白酶。有報道稱,SW480 [SW-480]細(xì)胞表達(dá)GM-CSF。SW480 [SW-480]細(xì)胞ras原癌基因的12位密碼子有一個突變,可以用作PCR法檢測該突變的陽性對照。1978年11月,A·Leibovitz將其提交給ATCC時已傳代至第91代。 |
特別注意 |
SW480-LUC細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO2如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱,可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣 |
puro藥篩濃度 |
SW480細(xì)胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml,培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,如若擔(dān)心抗性隨著傳代時間降低,可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 |
細(xì)胞代數(shù) |
10代以內(nèi) |
生物安全等級 |
1 |
生長特性 |
貼壁生長 |
生長條件 |
氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
保藏機(jī)構(gòu) |
ATCC; CCL-228 DSMZ; ACC-313 ECACC; 87092801 |
培 養(yǎng) 基 |
90%L-15+10% FBS+PS |
凍存條件 |
無血清凍存液,液氮儲存 |
細(xì)胞貨期 |
現(xiàn)貨,1周左右 |
發(fā)貨方式 |
復(fù)蘇發(fā)貨(T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用) |
供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實驗使用,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
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T25瓶 |
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收貨處理 |
觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) |
傳代密度 |
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) |
傳代比例 |
首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 |
傳代方法 |
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-5 min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
注意事項 |
1. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2. 因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。 |
凍存管 |
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收貨處理 |
到細(xì)胞后,需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 |
傳代密度 |
第二天換液并檢查細(xì)胞密度 |
傳代比例 |
一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
傳代方法 |
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
注意事項 |
1. 收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存。 2. 為保證細(xì)胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 |
三、細(xì)胞凍存操作 |
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凍存液配方 |
無血清凍存液,液氮儲存 |
細(xì)胞密度 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例 |
凍存方法 |
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
注意事項 |
凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案 |
四、售后服務(wù) |
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細(xì)胞予重發(fā) |
1.細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)。 2.收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā)。 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā)。 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實后,重發(fā)。 6.細(xì)胞活性問題,請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā)。 |
細(xì)胞不重發(fā) |
1.客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā)。 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā)。 |
五、特別說明 |
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上海紀(jì)寧生物客戶購買本公司的細(xì)胞過程中,有任何技術(shù)問題或?qū)嶒瀱栴},都可以撥打我們的免費(fèi)服務(wù)電話15800441226 / 021-54721350,我們隨時給予技術(shù)中/實驗中的免費(fèi)解答。 |