英文名稱 : Protein Free Thiol Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 : 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 : 50T/24S
儲(chǔ)存條件 : 2-8℃
檢測(cè)方法 : 可見分光光度法
有 效 期 : 6個(gè)月
產(chǎn)品組成:
試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體 25 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體 25mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體60mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體17mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體2mL×1支
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說(shuō)明:
巰基的存在使得蛋白質(zhì)能夠進(jìn)行二硫鍵的形成, 從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性。此外, 巰基還參與到氧化 還原反應(yīng)中, 具有重要的生物學(xué)作用。 在細(xì)胞內(nèi),巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān),因此巰基 也成為了生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要研究對(duì)象。本試劑盒測(cè)定的是蛋白質(zhì)中的游離巰基含量。一定條件下巰基會(huì)發(fā)生親核反應(yīng),即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在 412nm處有吸收峰,據(jù)此可以計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、 研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、丙酮(AR)、蒸餾水。
注意事項(xiàng):
1. 若樣本ΔA測(cè)定<0.01,可適當(dāng)增大樣本量后測(cè)定,注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計(jì)算公式;若樣本ΔA測(cè)
定>1.5,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測(cè)定,注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
2.可使用BCA法測(cè)定蛋白濃度。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1、取100μL馬血清,按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.110-0.021=0.089,
ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.633-0.076=0.557,按樣本液體體積計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量得: 蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/mL)=2.5×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)×F =0.399μmol/mL。
2、取0.1036g鼠肝,按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.339-0.095=0.244,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.633-0.076=0.557 ,按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量得:
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =1.057μmol/g 質(zhì)量。
3、取 0.1078g 黃豆粉,沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后, 按照測(cè)定步驟操作, 用1mL 玻璃比色皿測(cè)得 ΔA測(cè)定 =A測(cè)定-A對(duì)照=0.108-0.033=0.075,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557,按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)游離 巰基含量得:
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.625μmol/g 質(zhì)量。